技術(shù)原理與實(shí)驗(yàn)步驟

穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株構(gòu)建一般是通過(guò)慢病毒方法構(gòu)建的。構(gòu)建慢病毒包裝需要的表達(dá)質(zhì)粒及包裝質(zhì)粒，用轉(zhuǎn)染試劑將質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到293T等病毒包裝細(xì)胞中可完成病毒包裝。包裝好的慢病毒感染細(xì)胞后，會(huì)將目的表達(dá)基因整合到細(xì)胞基因組中，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定表達(dá)，通過(guò)表達(dá)載體上的篩選基因如熒光、抗生素等可實(shí)現(xiàn)陽(yáng)性細(xì)胞篩選。本公司擁有熒光蛋白Venus、mCherry、mKate、GFP、EYFP等質(zhì)粒，運(yùn)用慢病毒包裝系統(tǒng)包裝慢病毒，感染CHO、Hela、客戶需求細(xì)胞，可構(gòu)建用于檢測(cè)基因表達(dá)、蛋白定位相關(guān)的熒光蛋白融合細(xì)胞株。

參考文獻(xiàn)

Monitoring G protein-coupled receptor activation using an adenovirus-based b-arrestin bimolecular fluorescence Q1 complementation assay. Analytical Biochemistry, 2013.

服務(wù)流程

1. 客戶提供基因信息及需求；
2. 選擇合適的表達(dá)質(zhì)粒載體，合適的熒光蛋白，合理的熒光蛋白拆分位點(diǎn)，分子克隆構(gòu)建質(zhì)粒；
3. 構(gòu)建成功的表達(dá)質(zhì)粒與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞；
4. 收集病毒，熒光細(xì)胞計(jì)數(shù)法測(cè)定病毒滴度；
5. 病毒感染CHO、Hela或客戶需求細(xì)胞，熒光檢測(cè)并用流式細(xì)胞儀分選；
6. 根據(jù)客戶對(duì)穩(wěn)轉(zhuǎn)細(xì)胞株的要求如體積、細(xì)胞數(shù)等提供細(xì)胞株，附加質(zhì)粒構(gòu)建引物、測(cè)序結(jié)果、細(xì)胞熒光檢測(cè)、流式細(xì)胞儀分選結(jié)果等信息。